Биолистическая трансформация сои с использованием нового селективного маркерного гена устойчивости к динитроанилинам

Abstract

Проведена биолистическая трансформация сои с использованием конструкции pAHTUAm, содержащей мутантный ген α-тубулина, в качестве селективного маркерного гена, обеспечивающего устойчивость к динитроанилиновым гербицидам, а также дополнительной конструкции pAHTUB1, содержащей полноразмерный ген β-тубулина ячменя, для корректной коэкспрессии экзогенного тубулина в клетках трансгенных линий сои. Определено, что 10 мкМ является наиболее оптимальной селективной концентрацией трифлюралина при отборе трансформированных линий сои. Трансгенная природа отобранных регенерантов подтверждена при помощи Саузерн-блоттинга с использованием специфической пробы к селективному гену α-тубулина.

Здійснено біолістичну трансформацію сої з використанням конструкції pAHTUAm, що містила мутантний ген α-тубуліну, як селективний маркерний ген, що забезпечує стійкість до динітроанілінових гербіцидів, а також додаткової конструкції pAHTUB1, яка містила повнорозмірний ген β-тубуліну ячменя, для коректної коекспресії екзогенного тубуліну в клітинах трансгенних ліній сої. Встановлено, що 10 мкМ трифлюралін є найоптимальнішою селективною концентрацією при відборі трансформованих ліній сої. Трансгенну природу відібраних регенерантів підтверджено за допомогою Саузерн-блотингу з використанням специфічної проби до селективного гена α-тубуліну.

Biolistic transformation of soybean by construction carrying a mutant α-tubulin gene as selective marker gene conferring resistance to dinitroaniline herbicides, and by additional construction pAHTUB1 carrying a full-length barley β-tubulin gene for correct co-expression of exogeneous tubulin in cells of transgenic soybean lines has been realized. It was established that 10 μM trifluralin is the most optimal selective concentration to pick up transformed soybean lines. Transgenic nature of offained regenerants was confirmed by Southern blotting hybridization using specific probe to selective α-tubulin gene.