Конструювання штамів Streptomyces peucetius subsp. caesius atcc 27952-Конструювання штамів Streptomyces peucetius subsp. caesius atcc 27952-2 з підвищеною здатністю перетворювати даунорубіцин в доксорубіцин 2 з підвищеною здатністю перетворювати даунорубіцин в доксорубіцин

Abstract

Гени срх та dnrl (кодують P-450-вмісний фермент, що гідроксилює даунорубіцин (DNR) з утворенням доксорубіцину (DXR), та позитивний активатор транскрипції) S. griseus під сильним промотором гена стійкості до норзіотрицину not S. noursei в складі мультикопійної плазміди pIJ 486 клоновано в штами S. peucetius subsp. caesius ATCC 27952-2 ma S. lividans TK 24. 48-год культури штамів 27952-2 plJ486dnrlcpx⁺, TK 24 pIJ486dnrIcpx⁺ ma DNRr-мутанти штаму 27952-2 (з підвищеним синтезом DXR) утворювали DXR з доданого DNR. У 27952-2 pIJ486dnrIcpxr зростав синтез антрациклінів, DNR та DXR. Проте ефективність перетворення та концентрація P-450-вмісного ферменту найвищі серед DNRT-мутантів. Стійкість DNR1-му­тантів до DNR зумовлена не лише функціонуванням генів резистентності, але й ферментатив­ним перетворенням більш токсичної для штаму сполуки DNR в менш токсичну DXR. Це дозволяє отримувати більш дорогий та терапевтично цінніший антибіотик DXR з його попередника (DNR).

Гены срх и dnrl (кодируют P-450-содержащий фермент, гидроксилирующий даунорубицин (DNR) с образованием доксорубицина (DXR), и активатор транскрипции) S. griseus под сильным промотором гена устойчивости к норзиотрицину nat S. noursei в составе мультикопийной плазмиды pIJ 486 клонированы в штаммы S. peucetius subsp. caesius ATCC 27952-2 и S. lividans ТК 24. Штаммы 27952-2 pIJ486dnrIcpx⁺, TK 24 pIJ486dnrIcpx⁺ и DNRr -мутанты штамма 27952-2 (с повышенным синтезом DXR) образуют DXR из добавленного к 48-ч культурам этих штаммов DNR. У 27952-2 pIJ486dnrlcpx возрастает синтез антрациклинов, DNR и DXR. Однако эффективность превращения DNR в DXR и концент­рация P-450-содержащего фермента наивысшие среди DNRr- мутантов. Устойчивость DNRr-мутантов к DNR обусловле­на не только функционированием генов резистентности, но и ферментативным превращением более токсичного для штам­ма соединения DNR в менее токсичное DXR. Это позволяет получать более дорогостоящий и терапевтически ценный ан­тибиотик DXR из его предшественника (DNR).

Genes cpx and dnrl (encode P-450 enzyme that hydroxilize daunorubicin (DNR) converting it to doxorubicin (DXR) and transcription activator, respectively) leukaemomycin biosynthesis gene cluster of S. griseus were cloned in multicopy pIJ486 under control of strong promoter not (from noursethricin resistance gen noursei) and introduced into strains S. peucetius subsp. caesius ACC 27952-2 a TK24. 48-hous old cultures of strains 279S2-2 (pIJ486cpx dnrl⁺), TK24 (pIJ486cpx⁺ dnrl DNRr-mutants of strain 27952-2 synthesize DXR from exogenously added DNR. In s 27952-2 pJJ486cpx+ dnrl production of antracydines, DNR and DXR was increased. Although guantity of converted DNR and concentration of P-450 hydroxylase was highest in DNRr-mutants of strain 27952-2. Thus, resistance of DNRr-mutants to DNR depends not only on functioning of res gene but also on conversion of more toxic for given strain compound (DNR) to I (DXR). It allows to obtain more valuable antibiotic from its Intermediate.