Adaptor protein TDRD7 is co-localized with ribosomal protein S6 kinases S6K1 and S6K2 in cell lines of different tissue origin

Abstract

Our previous studies have shown that S6K1 and S6K2 protein kinases form the complexes with newly identified adaptor protein TDRD7, which is involved in regulation of cytoskeleton dynamics, mRNA transport, protein translation, piRNAs processing and transposons silensing. Aim Determination the subcellular localization of S6K1-TDRD7 and S6K2-TDRD7 protein complexes. Methods. Immunofluorescense microscopy was used to study co-localization of S6K1/S6K2 and TDRD7 in HEK293, HEPG2 cell lines as well as in rat primary hippocampal neurons using primary polyclonal anti-S6K1 antibodies, monoclonal anti-S6K2 and anti- TDRD7 antibodies. Results. It was found that S6K1 is co-localized with TDRD7 in perinuclear region of HEK293 cells. S6K1 and S6K2 were also co-localized with TDRD7 in perinuclear region of HEPG2 cells and in soma of primary rat hippocampal neurons. Conclusions. In this report we provide an additional experimental evidences of possible S6K1-TDRD7 and S6K2-TDRD7 complexes formation in cells of different tissue origins that may reflect their potential physiological importance. However, elucidation of the exact composition of these complexes and their role in cell physiology requires additional studies.

Раніше нами показано, що протеїнові кінази S6K1 і S6K2 формують комплекси з нещодавно ідентифікованим адапторним білком TDRD7, залученим до регуляції динаміки цитоскелету, транспорту мРНК, трансляції білків, процесингу піРНК та сайленсингу транспозонів. Мета. Визначення субклітинної локалізації можливих комплексів S6K1– TDRD7 і S6K2–TDRD7. Методи. Клітинні лінії HEK293, HEPG2 і первинна культура нейронів гіпокампу щура використано для імунофлуоресцентного аналізу із застосуванням поліклональних анти-S6K1 антитіл та моноклональних анти-S6K2 і анти-TDRD7 антитіл. Результати. Виявлено, що S6K1 співлокалізується з TDRD7 переважно в навколоядерній зоні клітин НЕК293. Окрім того, S6K1 і S6K2 співлокалізуються з TDRD7 також переважно у навколоядерній ділянці клітин HEPG2 та в сомі первинної культури нейронів гіпокампу щура. Висновки. Отримано додаткові експериментальні свідчення щодо формування комплексів S6K1– TDRD7 і S6K2–TDRD7 у клітинах різного тканинного походження, що, ймовірно, підтверджує їхню фізіологічну значущість. Втім, для визначення точного складу комплексів і з’ясування їхньої ролі у клітинах необхідні додаткові дослідження.

Раніше нами показано, що протеїнові кінази S6K1 і S6K2 формують комплекси з нещодавно ідентифікованим адапторним білком TDRD7, залученим до регуляції динаміки цитоскелету, транспорту мРНК, трансляції білків, процесингу піРНК та сайленсингу транспозонів. Мета. Визначення субклітинної локалізації можливих комплексів S6K1– TDRD7 і S6K2–TDRD7. Методи. Клітинні лінії HEK293, HEPG2 і первинна культура нейронів гіпокампу щура використано для імунофлуоресцентного аналізу із застосуванням поліклональних анти-S6K1 антитіл та моноклональних анти-S6K2 і анти-TDRD7 антитіл. Результати. Виявлено, що S6K1 співлокалізується з TDRD7 переважно в навколоядерній зоні клітин НЕК293. Окрім того, S6K1 і S6K2 співлокалізуються з TDRD7 також переважно у навколоядерній ділянці клітин HEPG2 та в сомі первинної культури нейронів гіпокампу щура. Висновки. Отримано додаткові експериментальні свідчення щодо формування комплексів S6K1– TDRD7 і S6K2–TDRD7 у клітинах різного тканинного походження, що, ймовірно, підтверджує їхню фізіологічну значущість. Втім, для визначення точного складу комплексів і з’ясування їхньої ролі у клітинах необхідні додаткові дослідження.