Культивирование in vitro, ростовые параметры и оценка способности к биосинтезу гликозидов культуры клеток Digitalis purpurea L.

Abstract

Получены и охарактеризованы по ростовым параметрам каллюсная и суспензионная культуры наперстянки пурпурной Digitalis purpurea L. — источника сердечных гликозидов. Установлено, что оптимальными условиями для каллюсогенеза является инкубация листовых эксплантатов на среде МС с добавлением 3 мг/л 2,4-Д, в темноте, при 26 ± 2 °С. Для субкультивирования подобрана комбинация гормонов ИУК — 0,1 мг/л и БАП — 0,1 мг/л. Суспензионная культура получена на среде с теми же гормонами без ионов кальция. Определены ее ростовые показатели: индекс роста, жизнеспособность, время удвоения, скорость роста клеток, которые показали, что культура хорошо адаптировалась к условиям in vitro и представляет собой активно растущую клеточную популяцию. Методом ВЭЖХ доказана способность культуры клеток синтезировать тот же спектр гликозидов, что и интактное растение.

Отримано і схарактеризовано за ростовими параметрами калюсну й суспензійну культури наперстянки пурпурової Digitalis purpurea L. — джерела серцевих глікозидів. Установлено, що оптимальними умовами для калюсогенезу є інкубація листкових експлантатів на середовищі МС із додаванням 3 мг/л 2,4-Д, у темряві, за 26 ± 2 °С. Для субкультивування підібрано комбінацію гормонів IОК — 0,1 мг/л і БАП — 0,1 мг/л. Суспензійну культуру отримано на середовищі з тими ж гормонами без іонів кальцію. Визначено її ростові показники: індекс росту, життєздатність, час подвоєння, швидкість росту клітин, які показали, що культура добре адаптувалась до умов in vitro і є клітинною популяцією, що активно росте. Методом ВЕРХ доведено здатність культури клітин синтезувати той самий спектр глікозидів, що й інтактна рослина.

The Digitalis purpurea L. callus and suspension culture, a source of cardiac glycosides, have been received and characterized by the growth parameters. An optimal conditions for callus induction are the incubation of leaf explants on MS medium with 3 mg/l 2,4 D, in the dark at 26 ± 2 °C. For subculturing combination of hormones IAA 0.1 mg/l and BAP 0.1 mg/l was selected. Suspension culture was obtained in the same medium with calcium ions free. The indices of growing cultures — growth index, viability, cells doubling time and growth rate showed that the cell culture well adapted to conditions in vitro and actively grown. The ability of culture cells to cardiac glycosides synthesis, as well as intact plant, showed by HPLC.