Lys-plasminogen stimulates vitronectin exposure on the platelet surface

Abstract

Aim. To study the vitronectin exposure on the platelet surface in the presence of two forms of the plasminogen molecule: Lys- and Glu-plasminogens. Methods. Research was conducted on human platelets. Aggregometry was used to check the platelet vitality and cell response towards thrombin. To evaluate the influence of different plasminogen forms on the platelet vitronectin exposure we used the method of flow cytometry. Results. It was found that incubation of resting platelets with Lys-plasminogen increased the amount of vitronectin-positive cells, but did not affect significantly their fluorescent intensity. Thrombin stimulation led to an increase in both: the number of vitronectin-positive platelets and the signal of fluorescence at least by two times. The Lys-plasminogen adding to the suspension of washed platelets followed by the thrombin stimulation enhanced the vitronectin exposure on the platelet surface and increased the amount of vitronectin-positive cells as compared to the isolated thrombin stimulation. Glu-plasminogen had no effect on the vitronectin exposure in case of resting or stimulated platelets. Conclusions. Lys-plasminogen but not its Glu-form enhances the exposure of vitronectin on the platelet surface. We suggest that the binding of Lys-plasminogen to the surface platelet receptors may generate plasmin that leads to the activation of intracellular signaling cascade.

Мета. Дослідити експонування вітронектину на поверхні тромбоцитів за присутності двох форм плазміногену: Lys- та Glu-плазміногену. Методи. Дослідження проводили на тромбоцитах людини. Для перевірки життєздатності клітин та клітинної відповіді на стимуляцію тромбіном використовували метод агрегометрії. Для оцінки впливу різних форм плазміногену на експонування вітронектину тромбоцитами було використано метод протокової цитометрії. Результати. Було показано, що інкубація інтактних тромбоцитів з Lys-плазміногеном призводила до зростання кількості віт­ро­нек­тин-позитивних клітин, але суттєво не впливала на їх інтенсивність флуоресценції. Стимуляція тромбіном супровод­жу­валася принаймні двократним зростанням як кількості віт­ронектин-позитивних тромбоцитів, так і інтенсивності сигналу флуоресценції. Додавання Lys-плазміногену до суспензії відмитих тромбоцитів з наступною активацією тромбіном підсилювало експонування вітронектину на тромбоцитарній поверхні та збільшувало кількість вітронектин-позитивних клітин порівняно з ізольованою стимуляцією агоністом. Glu-плаз­мі­ноген не спричиняв впливу на експонування вітронектину в разі інтактних та активованих тромбоцитів. Висновки. Lys-плазміноген, але не його Glu-форма, підсилює експонування вітронектину на поверхні тромбоцитів. Ми припускаємо, що зв’язування Lys-плазміногену з рецепторами тромбоцитарної поверхні може сприяти утворенню плазміну, який, в свою чергу, запускає процеси внутрішньоклітинного сигналінгу.

Цель. Исследовать экспонирование витронектина на поверхности тромбоцитов в присутствии двух форм плазминогена: Lys- и Glu-плазминогена. Методы. Исследования проводили на тромбоцитах человека. Для проверки жизнеспособности тромбоцитов и клеточного ответа на тромбиновую стимуляцию использовали метод агрегометрии. Для оценки влияния разных форм плазминогена на экспонирование витронектина тромбоцитами использовали метод проточной ци­тометрии. Результаты. Было показано, что инкубация ин­тактных тромбоцитов с Lys-плазминогеном приводила к уве­личению количества витронектин-позитивных клеток, но не оказывала существенного влияния на их интенсивность флю­оресценции. Стимуляция тромбином сопровождалась по меньшей мере двукратным увеличением как числа витронектин-позитивных тромбоцитов, так и интенсивности сигнала флюоресценции. Добавление Lys-плазминогена к суспензии отмытых тромбоцитов с последующей активацией тромбином усиливало экспонирование витронектина на тромбоцитарной поверхности и увеличивало количество витронектин-позитивных клеток по сравнению с изолированной стимуляцией агонистом. Glu-плазминоген не оказывал влияния на экспонирование витронектина в случае интактных или активированных тромбоцитов. Выводы. Lys-плазминоген, но не его Glu-форма, усиливает экспонирование витронектина на поверхности тромбоцитов. Мы предполагаем, что связывание Lys-плазминогена с рецепторами на тромбоцитарной поверхности может способствовать образованию плазмина, который, в свою очередь, запускает процессы внутриклеточного сигналинга.