Биополимеры и клетка, 1996, № 5http://dspace.nbuv.gov.ua:80/handle/123456789/1510232024-03-29T14:53:15Z2024-03-29T14:53:15ZDNA recombinant molecules carrying different allels of human preproinsulin gene as mutagens in Chinese hamster cellsRubashevsky, E.L.Patskovsky, Y.V.Kirilenko, S.D.Varzanova, I.S.Bogolyubova, O.M.Lysenko, O.F.Lukash, L.L.http://dspace.nbuv.gov.ua:80/handle/123456789/1542342019-06-15T22:29:50Z1996-01-01T00:00:00ZDNA recombinant molecules carrying different allels of human preproinsulin gene as mutagens in Chinese hamster cells
Rubashevsky, E.L.; Patskovsky, Y.V.; Kirilenko, S.D.; Varzanova, I.S.; Bogolyubova, O.M.; Lysenko, O.F.; Lukash, L.L.
In our earlier investigations it was discovered the nuttagenic activity of two recombinant plasmids (pBR322ins and pAins) containing the human preproinsulin gene in cultivated somatic mammalian cells. The preproinsulin gene (allel-1) was able to function under its own promoter in different cell types since it lacked a regulatory element providing tissue-specific expression. Introduction of a frameshift mutation into the region of initiation of the translation of the transgene (allel-2) diminished the mutagenic effect of a corresponding recombinant plasmid on gene level. In this work the mutagenic activity of the recombinant plasmids carrying allel-1 (pBR322ins) andallel-2 (pBR322insN) of the preproinsulin gene was studied using cytogenetic test. It was shown that the presence of allel-2 (that probably had altered expression of the transgene) in the recombinant plasmid structure decreased the level of induced chromosome breaks per cell. It was made a conclusion that not only viruses and their genes but also recombinant DNAs of nonviral origin are able to induce chromosome and gene mutations in mammalian cells. The mutagenic activity of studied recombinant plasmids depends on the level of expression of the transgenes in the cells.; У наших попередніх дослідженнях було відкрито мутагенну активність двох рекомбінантних плазмід (pBR322ins та pAins), які несуть ген препроінсуліну людини, у соматичних клітинах ссавців, що культивуються. Ген препроінсуліну (алель-1) має здатністьфункціонувати під своїм власним промотором у різних типах клітин, оскільки втратив регуляторний елемент, який забезпечує тканинну специфічність експресії. Введення мутації зсуву рамки зчитування в район ініціації трансляції трансгена (алель-2) призводило до зменшення мутагенного ефекту відповідної рекомбінантної плазміди на генному рівні. У цій роботі вивчалась мутагенна активність рекомбінантних плазмід, що несуть алель-1 (pBR322ins) та алель-2 (pBR322insN) гена препроінсуліну, з використанням цитогенетичного тесту. Показано, що присутність алеля-2 (який, можливо, має пошкодження експресії трансгена) у структурі рекомбінантної плазміди призводить до зниження рівня хромосомних розривів на клітину. Зроблено висновок стосовно того, що не тільки віруси та їх гени, а й рекомбінантні ДНК невірусної природи здатні індукувати хромосомні та генні мутації у клітинах ссавців. Мутагенна активність досліджуваних рекомбінантних плазмід залежить від експресії трансгенів у клітинах.; В наших предыдущих исследованиях была обнаружена мутагенная активность двух рекомбинантных плазмид (pBR322ins и pAins), содержащих ген инсулина человека, в культивируемых соматических клетках млекопитающих. Ген инсулина (аллель-1) способен функционировать под своим собственным промотором в различных типах клеток, поскольку утратил регуляторний элемент, обеспечивающий тканеспецифичность экспрессии. Введение мутации сдвига рамки считывания в район инициации трансляции трансгена (аллель-2) приводило к снижению мутагенного эффекта соответствующей рекомбинантной плазмиды на генном уровне. В этой работе изучена мутагенная активность рекомбинантных плазмид, несущих аллель-1 (pBR322ins) и аллель-2 (pBR322insN) гена препроинсулина, с использованием цитогенетического теста. Показано, что присутствие аллеля-2 (имеющего, вероятно, поврежденную экспрессию трансгена) в структуре рекомбинантной плазмиды, вызывало снижение уровня хромосомных разрывов на клетку. Сделан вывод о том, что не только вирусы и их гены, а также рекомбинантные ДНК невирусной природы способны индуцировать хромосомные и генные мутации в клетках млекопитающих. Мутагенная активность исследуемых рекомбинантных плазмид зависит от экспрессии трансгенов в клетках.
1996-01-01T00:00:00ZСиквенс к ДНК С-концевой последовательности капсидного белка ВТМ-изолята томата из района радиологического загрязненияБойко, А.Л.Степанюк, С.А.Гарифулин, О.М.http://dspace.nbuv.gov.ua:80/handle/123456789/1542332019-06-15T22:29:41Z1996-01-01T00:00:00ZСиквенс к ДНК С-концевой последовательности капсидного белка ВТМ-изолята томата из района радиологического загрязнения
Бойко, А.Л.; Степанюк, С.А.; Гарифулин, О.М.
Из района с плотностью радиологического загрязнения по Cs137 11 Ku/ км2 выделены из растений томата два идентичных изолята вируса табачной мозаики, получены рекомбинантные плазмиды pTVM7 и pTVM7.5, содержащие кДНК полного провируса и иммуноспецифическую С-концевую последовательность кДНК капсидного белка для одного из выделенных изолятов. Структурные белки полученных вирусов характеризуются довольно высокой – 19 ±1,9 к Да (17,5 к Да для стандартного штамма ВТМ) молекулярной массой по результатам DS-Na – ПААГ электрофореза. Иммуноблот-анализ трипсиновых фрагментов капсидных белков изолятов и выделенного ранее контрольного штамма далемского изолята не выявил отличий в распределении иммуноактивных фрагментов относительно антисыворотки контроля. По сиквенсу к ДНК pTVM7.5 обнаружена консервативная замена остатка серина на треонин в положении 148 для гомологичного района капсидного белка далемского штамма ВТМ, что может свидетельствовать об иммунологической значимости данного района капсидного белка изолята. Предложен возможный механизм опосредованных физиологическими процессами в инфицированном растении появления и сохранения подобной замены.; Із района зі щільністю радіологічного забруднення по Cs13711 Кі/км2 виділено з рослин томата два ідентичних ізоляти вірусу тютюнової мозаїки, отримано рекомбінантні плазміди pTVM7 і PTVM7.5, що містять відповідно кДНК повного провірусу і імуноспецифічну С-кінцеву послідовність кДНК капсидного білка для одного з виділених ізолятів. Структурні білки отриманих вірусів характеризуються досить високою – 19±1,9 кДа (17,5 кДадля стандартногоіитамаВТМ) молекулярною масою за результатами DS-Na – ПААГ електрофорезу. Імуноблот-аналіз трипсинових фрагментів капсидних білків ізолятів і виділеного раніше контрольного ізолята томатного (далемського) штама не виявив відмінностей у розподілі імуноактивних відносно антисироватки контролю фрагментів. Сиквенс кДНКрТУМ7.5 дозволив виявити консервативну заміну залишку серину на треонін у положенні 148 для гомологічного району капсидного білка далемського штама ВТМ, що може свідчити про імунологічну значущість даного району капсидного білка. Запропоновано можливий механізм опосередкованоих фізіологічними процесами в інфікованій рослині появи і збереження такої заміни.; Two identical strains of tomato type TVM have been isolated at region with Cs137 nuclear contamination with apparently 11 Cilkm2 activity and recombinant plasmids (pTVM7, pTVM7.5) with insert of cDNA provirus and cDNA for C-end specific capsid protein region correspondently from one of isolated viruses have been obtained. The capsid proteins of isolated strains has unusually higher 19±1,9 kDa molecular weight than standard TVM strain (17,5 kDa) on SDS-PAAG electrophoresis data. There have not been found differences in distribution of immunoactivity trypsin-digested protein fragments between isolated strains and control strain on immunoblot data analysis with control antiserum. Sequencing analysis of cDNApTVM7.Shaveshowedoutononeconservativeaminoacidreplacementofthreonineinsteadofserine in position 148 with comparison of that standard tomato TVM sequencing, which allow to make consideration about immunologically importance of this capsid protein region TVM. Also discussed possible mechanism of appearence and keeping such type aminoacid replacement as mediated of physiological processes in infected plant.
1996-01-01T00:00:00ZКлонування та надекспресія фрагмента гена структурного білка El штама Ші-Минь вірусу класичної чуми свиней в Escherichia coliКириленко, С.Д.Дерябін, О.М.Кириленко, О.Л.Дерябіна, О.Г.Бусол, В.О.http://dspace.nbuv.gov.ua:80/handle/123456789/1542322019-06-15T22:29:48Z1996-01-01T00:00:00ZКлонування та надекспресія фрагмента гена структурного білка El штама Ші-Минь вірусу класичної чуми свиней в Escherichia coli
Кириленко, С.Д.; Дерябін, О.М.; Кириленко, О.Л.; Дерябіна, О.Г.; Бусол, В.О.
З використанням зворотньо-транскриптазної полімеразної ланцюгової реакції клоновано та секвеновано фрагмент гена білка Е1 вірулентного штама Ші-Минь вірусу класичної чуми свиней довжиною 775 пар нуклеотидів. Отримано експресію цього фрагмента в Е. coli у вигляді злитого з глутатіон-й-трансферазою білка. Молекулярна маса частини білка E1 збігалася з розрахованою теоретично та становила близько 31 к Да. Рекомбінантний білок знаходився головним чином у нерозчинній фракції, його кількість становила до 15% від загального білка клітини. Обговорюються можливості застосування отриманого рекомбінантного білка.; С использованием обратно-транскриптазной полимеразной цепной реакции клонирован и секвенирован фрагмент гена белка Е1 вирулентного штамма Ши-Мынь вируса классической чумы свиней длиной775 пар нуклеотидов. Получена экспрессия этого фрагмента в Е. coli в виде слитого сглутатион-З-трансферазой белка. Молекулярная масса части белка Е1 совпала с рассчитанной теоретически и составила около 31 к Да. Рекомбинантный белок находится, главным образом, в нерастворимой фракции, его количество составляет до 15% общего белка клетки. Обсуждаются возможности применения полученного рекомбинантного белка.; A fragment of El gene of virulent strain Shi-Min of classical swine fever virus(CSFV) 775 bp in length has been cloned using reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR). Primary sequence of the cloned fragment has been determined. This fragment has been fused to glutathione-S-transferase and expressed in E. coli. Molecular weight of the part of El protein was estimated to be 31 kD as expected. The recombinant protein has been found mainly in insoluble fraction, its yield was up to 15% of the total cellular protein. Possible use of the protein is discussed.
1996-01-01T00:00:00ZНекоторые свойства вируса, изолированного из подсолнечникаКнязева, Н.А.Закусило, А.О.Диденко, Л.Ф.Бойко, А.Л.http://dspace.nbuv.gov.ua:80/handle/123456789/1541812019-06-15T22:29:09Z1996-01-01T00:00:00ZНекоторые свойства вируса, изолированного из подсолнечника
Князева, Н.А.; Закусило, А.О.; Диденко, Л.Ф.; Бойко, А.Л.
Изучены биологические и некоторые физико-химические свойства патогена, вызывающего желтую мозаику, гофрировку и деградацию листовой пластинки Helianthus annuus L. Установленные свойства изучаемого вируса позволили отнести его к роду Tospovirus семейства Bunyaviridae и идентифицировать как вирус, подобный вирусу бронзовости томатов.; Вивчено біологічні та деякі фізико-хімічні властивості патогена, що викликає жовту мозаїку, гофрировку та деградацію листкової пластинки Helianthus annuus L. Встановлені властивості досліджуваного вірусу дозволили віднести його до роду Tospovirus родини Bunyaviridae та ідентифікувати як вірус, подібний до вірусу бронзовості томатів (ВБТс).; Biological and some physical and chemical properties of a pathogen that causes yellow mosaic, leaf curl and degradation of the leafsheet of Helianthus annuus L. were studied. The properties of the virus studied allow to refer it to the Tospavirus geneus of the Bunyaviridae family, therefore this virus can be classified as the tomato spotted wilt-lice virus (TSWVh).
1996-01-01T00:00:00Z